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关键词：MTT法阿霉素 Hela细胞
肿瘤的化疗是肿瘤治疗中的重要手段之一[1] , 阿霉素(Adriamycin,ADM)是蒽环类抗生素,是一种被广泛应用于肿瘤化学治疗的重要药物之一。临床上，由于肿瘤患者对不同剂量化疗药物的敏感性差异较大，且化疗药物具有毒副作用[2]。为了达到较高的疗效，同时又减少药物的毒副作用，我们需要对抗癌药物的作用剂量进行一个筛选。MTT比色法是目前最常用的检测法，这种方法简单、快速、高效、灵敏、重复性高，现已被广泛运用于体外肿瘤药敏测定[3]。本实验采用MTT法检测不同浓度ADM对体外培养的Hela细胞的抑制效率，并对其结果进行分析，从而对临床上ADM治疗宫颈癌剂量筛选提供参考依据。
1材料与方法
1.1 材料
对数生长期宫颈癌细胞，华南师范大学生命科学学院提供。
1.2实验方法[4]
1.2.1细胞培养与药物处理
收集对数期Hela细胞，调细胞浓度为2.5×104／ml，分5组接入96孔板内，每组设4个孔作为重复实验。将细胞置于CO2培养箱内培养24后，吸出培养液，选4组分别加入不同浓度梯度的阿霉素。余1组为对照组(加细胞不加药)，另外设调零组(只加培养液)。共做4组实验。
1.2.2呈色及比色
将已加入阿霉素的Hela细胞置于培养箱内再培养72h，每孔加5mg/ml的MTT溶液20ul，继续孵育4h，弃去上清液后每孔加入二甲基亚砜 (DMSO)150 ul，放于震荡器上震荡 15 min后，用酶标仪 (492 nm波长)测每孔的OD值。
1.2.3计算与统计学分析
根据0D值求出肿瘤细胞抑制率，计算公式为抑制率= (对照组OD值均数－实验组OD 值均数)／对照组 OD值均数。用卡平方测验法比较各浓度的阿霉素对细胞增殖抑制率的差异。
2.结果与分析
表1 不同浓度阿霉素对Hela细胞增殖的抑制率
阿霉素剂量（ug/ml）
组别 1.25 2.5 5 10 20 40
1 -2.20% -22.20% -44.18% -57.14%
2 -54.68% -54.68% -65.39% -80.88%
3 -47.17% -67.12% -67.57% -68.48%
4 -51.31% -69.69% -67.30%
实验结果得到4组有效数据。从表1的结果表明：随着药物浓度的升高，对细胞生长的抑制率也越高。将各浓度的细胞抑制率求平均值，用卡平方测验各种剂量浓度的药物对细胞增殖抑制率间的差异，结果得出：在阿霉素浓度较低的情况下（小于10 ug/ml），阿霉素对宫颈癌细胞的抑制率随着浓度梯度的升高明显增大（P﹤0.05）；当阿霉素浓度达到10 ug/ml后，其对细胞的抑制率将不再增大（P﹥0.05）。
3.讨论
抗癌药物不仅对癌细胞有毒性作用，对于正常的细胞也具有毒性作用，阿霉素主要通过药物插入引发拓扑DNA裂解,破坏DNA三级结构，通过抑制细胞的DNA合成而抑制细胞的增殖。作为细胞周期非特异性药物,阿霉素的细胞毒作用可发生于各期细胞,但S期细胞对其最敏感[5]。为了提高药物的治疗指数，在临床上我们需要对抗癌药物的作用剂量进行筛选。本实验通过用不同剂量的阿霉素作用于细胞浓度相同的对数生长期Hela细胞，试验结果表明，阿霉素对 Hela细胞的增殖抑制基本上呈量效依赖关系，但当阿霉素浓度达到一定剂量时，对细胞的抑制率将不再升高。因此，临床床用药时，在患者可以承受的前提下，可适当提高药物浓度。但是，如果过度提高剂量，不仅没有达到提高癌症治疗效果的目的，反而给机体带来更大的毒副作用。本实验中作用的癌细胞浓度约为2.5×104／ml，而药物浓度10 ug/ml以后药物对Hela细胞的抑制效果不再增加，也即是每2.5×104 个体外Hela细胞的阿霉素剂量为10ug为时治疗指数最高。但由于本实验为体外敏感性实验，药物直接作用于细胞，而体内存在肝、肾等脏类器对药物的修饰作用，使药物疗效增强或减弱[6]，与体外敏感有差异，所以实验结果对为临床上用阿霉素治疗宫颈癌细胞的剂量选择仅能作为一点参考。另一方面，在临床上，不同的患者个体对药物种类及剂量的耐受能力也不相同。在肿瘤治疗过程中，根据患者肿瘤细胞多药耐药基因及相关因子的表达情况来选择适当的药物，可以延缓及减少肿瘤细胞耐药的发生，提高化疗药物的疗效。总之，在选择抗肿瘤药物时，遵照个体化原则对肿瘤的治疗是非常重要的。
参考文献
[1]辛华雯，王润帮，杜光祖，林鲁杰.十种常用抗癌药体外敏感性与临川疗效相关性研究[J].中国医院药学杂志[J].1994；14(12)
[2]程玺，蔡树模，李子庭，王华英等.MTT法检测子宫颈癌体外药物敏感性及其临床意义[J]. 肿瘤学杂志，2005；11（2）：83-85.
[3]王玉萍，邵斌，楚天骄，雷冬梅等.MTT法检测Hela细胞对化疗药物敏感性的研究[J]. 2006中国妇幼保健，2006；21.
[4]于宏波，宋阳，马兴纲，齐红等.MTT法测定复发转移性乳腺癌体外化疗药物敏感性实验研究[J].中国实验诊断学，2006；10（5）：174-175.
[5]刘一，边原.阿霉素抗肿瘤作用的研究进展[J].泸州医学院学报，2008；31（1）：101-103.
[6]陈晓文，孙达华，李允武.MTT法测定肿瘤细胞体外药物敏感性的临床运用[J].中国药房，2000；11（6）：254.
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